Plasmide CRISPR d'Activation (h) γ1-Adaptin: sc-403986-ACT

AP1G1 code la sous-unité γ1-adaptine humaine du complexe adaptateur de protéines 1 (AP‑1), un composant central du manteau qui sélectionne les cargaisons et favorise la formation de vésicules à clathrine au niveau du réseau trans‑golgien et des endosomes. En reconnaissant des motifs de tri sur les protéines transmembranaires, la γ1‑adaptine contribue à coordonner le recyclage des récepteurs, l’adressage vers les lysosomes et le trafic membranaire polarisé, influençant ainsi la durée des signaux et la composition des membranes. Le trafic dépendant d’AP‑1 s’interface avec la maturation endosomale et les voies autophagie‑lysosome, soutenant la protéostasie et la sécrétion régulée. Les altérations de la fonction des complexes adaptateurs et de la dynamique du transport vésiculaire sont largement pertinentes pour la recherche sur les phénotypes neurodéveloppementaux, le trafic des récepteurs des cellules immunitaires et la dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance observée dans de multiples contextes pathologiques.

γ1-Adaptin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AP1G1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

γ1-Adaptin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AP1G1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AP1G1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de γ1-Adaptin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AP1G1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de γ1-Adaptin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie γ1-Adaptin dans les cellules tumorales présentant une expression de AP1G1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.