Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) β-glucosidase: sc-417618-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) β-glucosidase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide β-glucosidase Double Nickase (h) et le plasmide β-glucosidase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GBA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: β-glucosidase Antibody (B-6): sc-166407
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) β-glucosidase | sc-417618-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) β-glucosidase | sc-417618-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GBA code la β‑glucosidase humaine (glucocérébrosidase), une hydrolase lysosomale qui clive le glucosylcéramide en céramide et glucose, contribuant au renouvellement des sphingolipides et à l’homéostasie des lipides membranaires. Cette enzyme agit au sein de la voie endo‑lysosomale et s’inscrit à l’interface de la biogenèse lysosomale et de processus liés à l’autophagie qui influencent la protéostasie cellulaire. Une altération de l’activité de GBA entraîne l’accumulation de substrats glycolipidiques et une dysfonction lysosomale, un mécanisme central de la physiopathologie de la maladie de Gaucher. Les variations de GBA sont également largement étudiées pour leur association avec des voies liées aux synucléinopathies, ce qui motive des travaux mécanistiques dans des systèmes modèles neuronaux et myéloïdes.
β-glucosidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GBA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GBA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GBA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GBA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.