β2-Adaptin Plasmide Double Nickase (h): sc-402404-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β2-Adaptin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β2-Adaptin Double Nickase Plasmid (h) e il β2-Adaptin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AP2B1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β2-Adaptin Plasmide Double Nickase (h) | sc-402404-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β2-Adaptin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402404-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AP2B1 codifica la β2-adaptina, una subunità centrale del complesso di proteine adattatrici 2 (AP-2) che collega i recettori del carico alla clatrina durante l’endocitosi mediata da clatrina alla membrana plasmatica. Attraverso il riconoscimento di motivi di smistamento e il coordinamento con fattori accessori, la β2-adaptina contribuisce a regolare l’internalizzazione e il riciclo di recettori, trasportatori e complessi di segnalazione, influenzando vie quali la segnalazione dei recettori tirosin-chinasici e il ciclo delle vescicole sinaptiche. Il traffico dipendente da AP-2 contribuisce al controllo della composizione di membrana e all’attenuazione dei segnali, e alterazioni di questi processi possono compromettere l’omeostasi cellulare e le risposte allo stress. Un’alterata funzione degli adattatori endocitici è stata associata a fenotipi del neurosviluppo e a una deregolazione del traffico dei recettori osservata in contesti di segnalazione rilevanti per il cancro.
β2-Adaptin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AP2B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AP2B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AP2B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AP2B1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.