α_1B-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403295-ACT

ADRA1B codifica o α1B-AR (receptor adrenérgico alfa-1B) humano, um GPCR responsivo a catecolaminas que se acopla principalmente às proteínas Gq/11 para ativar a fosfolipase C, a sinalização por fosfatos de inositol, a mobilização de Ca2+ intracelular e vias dependentes da proteína quinase C. A ativação do receptor também pode envolver a sinalização MAPK/ERK e regular a dinâmica do citoesqueleto, a secreção e respostas contráteis em tecidos com inervação adrenérgica. O α1B-AR contribui para o controle do tônus vascular e da reatividade do músculo liso e influencia a excitabilidade neuronal e a sinalização responsiva ao estresse. A sinalização adrenérgica desregulada envolvendo ADRA1B é estudada no contexto da fisiologia cardiovascular, de fenótipos neuropsiquiátricos e de alterações em vias proliferativas em sistemas modelo.

α1B-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADRA1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

α1B-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADRA1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADRA1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de α1B-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADRA1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de α1B-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via α1B-AR em células tumorais com expressão de ADRA1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.