α-parvin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405769

Descripción general

PARVA codifica la α-parvina, un adaptador de adhesión focal que se une a la actina y se asocia con la quinasa vinculada a integrinas (ILK) y PINCH para formar el complejo IPP, conectando las integrinas con el citoesqueleto de actina. Mediante interacciones con paxilina y otros componentes de adhesión, la α-parvina contribuye al ensamblaje de las adhesiones focales, a la remodelación del citoesqueleto y a la mecanotransducción durante el extendimiento y la migración celular. La señalización dependiente de PARVA se integra con las vías de integrinas/FAK y con la dinámica de la actina regulada por pequeñas GTPasas, favoreciendo la supervivencia dependiente de la adhesión y la polaridad celular. La desregulación de estos procesos es relevante en estudios sobre invasión de células tumorales, remodelación tisular asociada a fibrosis y biología cardiovascular y del músculo liso, donde se implican alteraciones de la adhesión y de la señalización contráctil.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO α-parvin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PARVA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PARVA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PARVA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína α-parvin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PARVA para la investigación de la señalización de α-parvin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PARVA críticos para la función de α-parvin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PARVA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido α-parvin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido α-parvin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PARVA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR α-parvin (h) y el plásmido HDR α-parvin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PARVA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PARVA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.