Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-gal A (m2): sc-419046-KO-2

Présentation

Gla code l’α-galactosidase A murine (α-gal A), une exoglycosidase lysosomale qui enlève les résidus α-galactosyl terminaux des glycosphingolipides et de glycoconjugués apparentés. Cette activité soutient le catabolisme lysosomal et l’homéostasie des lipides membranaires via la voie de dégradation des glycosphingolipides, reliant la fonction lysosomale à des processus de contrôle qualité cellulaires tels que l’autophagie et le trafic endolysosomal. L’altération de la fonction de l’α-gal A est classiquement associée à une accumulation de glycolipides et à des phénotypes de surcharge lysosomale, faisant de Gla une cible pertinente pour étudier les réponses au stress métabolique et le dysfonctionnement des organites. Dans des modèles murins, la perturbation de Gla peut servir à examiner comment une modification du renouvellement lipidique influence l’inflammation, la signalisation et la susceptibilité, spécifique à certains types cellulaires, à la charge lysosomale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-gal A (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gla dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gla, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gla à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-gal A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gla pour l'étude de la signalisation de α-gal A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gla essentiels à la fonction de α-gal A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gla pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-gal A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le α-gal A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gla. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-gal A plasmide HDR (m) et le α-gal A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gla pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gla définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.