α-gal A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-419046-KO-2

Übersicht

Gla kodiert die murine α‑Galactosidase A (α‑gal A), eine lysosomale Exoglykosidase, die terminale α‑galactosylierte Reste von Glycosphingolipiden und verwandten Glycokonjugaten abspaltet. Diese Aktivität unterstützt den lysosomalen Katabolismus und die Homöostase der Membranlipide über den Abbauweg der Glycosphingolipide und verknüpft die Lysosomenfunktion mit zellulären Qualitätskontrollprozessen wie Autophagie und endolysosomalem Transport. Eine Störung der α‑gal‑A‑Funktion ist klassischerweise mit der Anreicherung von Glykolipiden und lysosomalen Speicherphänotypen verbunden, wodurch Gla ein relevantes Ziel für die Untersuchung metabolischer Stressantworten und Organell‑Dysfunktionen ist. In Mausmodellen kann eine Perturbation von Gla genutzt werden, um zu untersuchen, wie ein veränderter Lipidumsatz Entzündung, Signalwege und die zelltypspezifische Anfälligkeit gegenüber lysosomaler Belastung beeinflusst.

Das α-gal A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gla-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gla-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gla nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α-gal A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gla-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α-gal A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gla-Exone abzielen, die für die α-gal A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gla-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α-gal A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom α-gal A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gla-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α-gal A HDR-Plasmid (m) und α-gal A HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gla-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gla-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.