α-actinin-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-430958-LAC

Actn1 codifica a α-actinina-1, uma proteína de ligação à actina insensível ao cálcio que entrecruza a F-actina em feixes e ancora filamentos do citoesqueleto a complexos de adesão. Em células de camundongo, a α-actinina-1 contribui para a organização do citoesqueleto, a forma celular e a mecanotransdução ao coordenar a remodelação de actina com a dinâmica das adesões focais e redes de sinalização, como as vias de GTPases da família Rho. Por meio dessas funções, ela influencia a migração celular, a estabilidade da membrana e a arquitetura de estruturas contráteis e de actina não muscular. Alterações na atividade ou na expressão da α-actinina-1 são relevantes para pesquisas sobre disfunção do citoesqueleto, fenótipos relacionados à adesão e distúrbios em que a integridade da rede de actina e a motilidade celular estão comprometidas.

As Partículas de Ativação Lentivirais α-actinin-1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Actn1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais α-actinin-1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Actn1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de α-actinin-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Actn1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.