ZIP-kinase CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-409173

개요

DAPK3(ZIP-키나아제)는 Ca2+/칼모듈린에 의해 조절되는 세린/트레오닌 키나아제로, 미오신 조절 경쇄(myosin regulatory light chain) 및 관련 세포골격 기질을 인산화함으로써 액토미오신(actomyosin) 역학과 수축성 신호전달을 조율합니다. 이는 스트레스 섬유(stress fiber) 형성, 막 블레빙(membrane blebbing), 세포질분열(cytokinesis), 프로그램된 세포사멸에 관여하는 경로에 참여하여, 세포골격 재구성을 세포 스트레스 반응과 연결합니다. ZIP-키나아제 활성은 ROCK/MLCK에 의해 조절되는 수축성과 교차하며, 인산화 의존적 신호 노드를 통해 전사적 출력에도 영향을 줄 수 있습니다. 조절 이상이 생긴 DAPK3 신호전달은 암 생물학과 관련된 증식, 운동성, 세포사멸 표현형의 변화와 연관되어 왔으며, 평활근 긴장도와 세포골격 조직이 교란되는 혈관 및 염증성 질환 기전과도 관련이 있습니다.

ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 DAPK3 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 DAPK3 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 DAPK3의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 ZIP-kinase 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 ZIP-kinase 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 DAPK3 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• ZIP-kinase 기능에 중요한 DAPK3 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 DAPK3 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 DAPK3 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  ZIP-kinase HDR 플라스미드 (h) 및 ZIP-kinase HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 DAPK3 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 DAPK3 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.