Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC6 (h): sc-418151

Présentation

ZCCHC6 (également appelé TUT7) code une uridyltransférase terminale contenant un doigt de zinc de type CCHC, qui catalyse l’uridylation en 3′ de divers substrats d’ARN, influençant la stabilité et la dégradation des ARN. Il s’agit d’un effecteur clé de la régulation génique post-transcriptionnelle, agissant sur des pré-miARN et des miARN matures et participant à des voies qui couplent l’ajout de queues d’ARN à la dégradation exonucleolytique. ZCCHC6 a été associé à la régulation des transcriptomes de l’immunité innée et des réponses au stress via la modulation du traitement et de la surveillance des ARN. Une uridylation des ARN dérégulée et une activité altérée de ZCCHC6 ont été associées à des perturbations de l’homéostasie des miARN et à des programmes d’expression génique pertinents pour le cancer et des phénotypes inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZCCHC6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZCCHC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZCCHC6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZCCHC6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZCCHC6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZCCHC6 pour l'étude de la signalisation de ZCCHC6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZCCHC6 essentiels à la fonction de ZCCHC6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZCCHC6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZCCHC6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZCCHC6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZCCHC6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZCCHC6 plasmide HDR (h) et le ZCCHC6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZCCHC6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZCCHC6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.