ZCCHC14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-411686

概要

ZCCHC14は、RNA結合機能に関与するとされる核内のCCHC型亜鉛フィンガータンパク質をコードしており、RNAの安定性やプロセシングなど、転写後の遺伝子発現制御に影響を及ぼします。RNA代謝を司る経路や、細胞の恒常性を形作る遺伝子発現プログラムの制御に関わる経路との関連が示されています。近年の知見から、ZCCHC14がウイルス—宿主相互作用にも関与する可能性が示唆されており、亜鉛結合性のRNA関連因子がウイルスRNAの利用や宿主トランスクリプトーム応答の調節に関与するという見方と整合的です。RNA結合タンパク質やRNAプロセシングネットワークの破綻は、がん性シグナル伝達や細胞状態の転換と広く関連するため、ZCCHC14はこれらの文脈における機構解析に有用な検討対象となります。

ZCCHC14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるZCCHC14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ZCCHC14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ZCCHC14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ZCCHC14タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ZCCHC14シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ZCCHC14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ZCCHC14の機能に不可欠なZCCHC14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ZCCHC14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ZCCHC14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびZCCHC14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ZCCHC14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ZCCHC14 HDRプラスミド（h）および ZCCHC14 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZCCHC14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZCCHC14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。