Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB5 (h): sc-411389

Présentation

ZBTB5 (zinc finger and BTB domain containing 5) code un facteur de transcription à domaine BTB/POZ qui se lie à l’ADN via des doigts de zinc C2H2 et serait impliqué comme régulateur spécifique de séquence de l’expression génique, notamment par le recrutement de complexes corépresseurs et de complexes modifiant la chromatine. En influençant des programmes transcriptionnels liés à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation et à l’état épigénétique, ZBTB5 peut façonner des réseaux géniques spécifiques de lignée et l’homéostasie cellulaire. Une expression dérégulée ou une activité altérée des protéines à domaine BTB–doigts de zinc est fréquemment associée à une reprogrammation transcriptionnelle oncogénique et à des changements à l’échelle du génome de l’accessibilité de la chromatine, ce qui fait de ZBTB5 une cible utile pour des études mécanistiques en cancérologie et en biologie de la prolifération. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de ZBTB5 aide à examiner comment la répression/l’activation transcriptionnelle s’articule avec le remodelage de la chromatine, le timing de réplication de l’ADN et les voies de réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZBTB5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZBTB5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZBTB5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZBTB5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZBTB5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZBTB5 pour l'étude de la signalisation de ZBTB5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZBTB5 essentiels à la fonction de ZBTB5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZBTB5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZBTB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZBTB5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZBTB5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZBTB5 plasmide HDR (h) et le ZBTB5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZBTB5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZBTB5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.