ZBP-89 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404898-ACT

Das humane Gen **ZNF148** kodiert den Krüppel-ähnlichen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor **ZBP-89**, ein an GC-reiche Promotoren bindendes Protein, das Transkriptionsprogramme der RNA-Polymerase II moduliert und so Zellzyklusprogression, Differenzierung und zelluläre Stressantworten steuert. ZBP-89 kann je nach Promotorkontext und Rekrutierung von Kofaktoren als Aktivator oder Repressor wirken, den Chromatinzustand beeinflussen und die Transkriptionsinitiation an Genen regulieren, die an Wachstumskontrolle und Apoptose beteiligt sind. Über seine Funktionen in der Transkriptionsregulation überschneidet sich ZBP-89 mit Signalwegen, die die epitheliale Homöostase und die Linienspezifizierung steuern, was es für Studien zu dysregulierter Proliferation und tumorassoziierten Transkriptionsnetzwerken relevant macht. Eine veränderte ZNF148-Aktivität wurde im Kontext der Krebsbiologie und inflammatorischer Signalgebung untersucht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt für Forschung zu Genregulation und Promotorfunktion unterstützt.

ZBP-89 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF148-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZBP-89 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF148-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF148-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZBP-89-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF148-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZBP-89-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZBP-89-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF148-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.