Plásmido CRISPR de Activación (m) Yes: sc-423744-ACT

Mouse Yes1 codifica una tirosina quinasa no receptora de la familia SRC que transduce señales aguas abajo de tirosina quinasas receptoras y de complejos de adhesión célula–célula para regular la proliferación, la supervivencia y la remodelación del citoesqueleto. La actividad de YES1 se integra con la señalización MAPK/ERK y PI3K/AKT y puede influir en la dinámica de las adhesiones focales y en la motilidad celular mediante la fosforilación de proteínas adaptadoras y de andamiaje. Las alteraciones en la señalización de YES1 se han vinculado con estados de señalización oncogénica, fenotipos de respuesta a fármacos y el reajuste de vías impulsadas por factores de crecimiento en múltiples contextos tumorales. En modelos de investigación básica y traslacional, la modulación de Yes1 respalda estudios sobre la redundancia de redes de señalización entre quinasas de la familia SRC y el “cross-talk” entre vías que controlan la diferenciación y la homeostasis tisular.

Yes El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Yes1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Yes El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Yes1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Yes1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Yes. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Yes1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Yes en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Yes en células tumorales con expresión de Yes1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.