WDR5 CRISPR Activation Plasmid (m2): sc-431247-ACT-2

Das Mausgen Wdr5 kodiert das WD-Repeat-haltige Protein 5 (WDR5), ein konserviertes, chromatinassoziiertes Gerüstprotein, das an Histon-H3-Schwänze bindet und SET1/MLL-Komplexe organisiert, um die H3K4-Methylierung und die transkriptionelle Aktivierung zu fördern. WDR5 koordiniert die epigenetische Regulation von Genexpressionsprogrammen, die die embryonale Entwicklung, die Festlegung von Zellschicksalen und die Proliferation steuern, indem es Promotor- und Enhancer-Zustände moduliert. Eine Fehlregulation des WDR5-abhängigen Chromatin-Remodelings und der H3K4-Methylierung wurde mit aberranten Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die für die onkogene Transformation und Entwicklungsstörungen relevant sind, was WDR5 zu einem nützlichen Ziel für die Aufklärung epigenomgetriebener Krankheitsmechanismen macht. Die Geneditierung von Wdr5 in Mausmodellen unterstützt Untersuchungen zur Assemblierung von Chromatinkomplexen, zu Transkriptionsschaltkreisen und zur funktionellen Genomik in Differenzierungs- und krankheitsrelevanten Zellsystemen.

WDR5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Wdr5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

WDR5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Wdr5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Wdr5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen WDR5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Wdr5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von WDR5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des WDR5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Wdr5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.