WDR22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435826

Panoramica

Dcaf5 codifica WDR22, una proteina contenente ripetizioni WD implicata nella biologia della ligasi E3 dell’ubiquitina DDB1–CUL4, in cui gli adattatori a ripetizioni WD contribuiscono a conferire specificità di substrato alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina. Attraverso questi complessi, WDR22 è nella posizione di influenzare il turnover proteico regolato che coordina la progressione del ciclo cellulare, il controllo qualità associato a replicazione/riparazione del DNA e la segnalazione responsiva allo stress. Alterazioni nelle dinamiche di ubiquitinazione sono ampiamente rilevanti per i meccanismi di instabilità genomica e di proliferazione deregolata, rendendo Dcaf5/WDR22 un utile punto di accesso per studiare vie collegate alla trasformazione oncogena e ad altri disturbi proliferativi nei sistemi modello. Nel topo, la perturbazione genetica di Dcaf5 può aiutare a definire ruoli specifici per tessuto e contesto delle reti di ligasi dell’ubiquitina associate a DCAF.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR22 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dcaf5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dcaf5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dcaf5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina WDR22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dcaf5 per lo studio della segnalazione di WDR22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dcaf5 critici per la funzione di WDR22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dcaf5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal WDR22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal WDR22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dcaf5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal WDR22 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR WDR22 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dcaf5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dcaf5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.