VPS54 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-434184

개요

Vps54는 엔도좀에서 trans-골지 네트워크(TGN)로의 역행 수송을 촉진하고 골지체의 올바른 조직화를 뒷받침하는 GARP(Golgi-associated retrograde protein) 테더링 복합체의 핵심 소단위인 VPS54를 암호화합니다. VPS54는 소포의 포획과 융합을 조율함으로써 막 단백질 재활용, 당화 의존적 화물 분류, 그리고 분비 경로 전반의 항상성 유지에 기여합니다. GARP 구성요소에 이상이 생기면 엔도리소좀 수송이 교란되고 세포 스트레스 반응이 유발되며, 수송 및 소기관 무결성 결함을 통해 신경세포 유지 경로에도 변화를 일으킬 수 있습니다. 막 수송은 단백질 항상성(proteostasis)과 신호전달과 긴밀히 연결되어 있기 때문에, Vps54는 신경발달 및 신경퇴행 관련 기전을 다루는 연구에서 자주 분석되는 유전자입니다.

VPS54 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Vps54 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Vps54 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Vps54의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 VPS54 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 VPS54 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Vps54 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• VPS54 기능에 중요한 Vps54 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Vps54 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• VPS54 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 VPS54 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Vps54 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  VPS54 HDR 플라스미드 (m) 및 VPS54 HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Vps54 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Vps54 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.