Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433270
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VPS33B O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico VPS33B, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:VPS33B Anticorpo (G-9): sc-398322
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433270 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Vps33b codifica a VPS33B, uma proteína da família Sec1/Munc18 que atua como um componente central da maquinaria de ancoragem e fusão que regula o tráfego endossomo–lisossomo. A VPS33B coopera com a rede VPS16/18/33/41 (relacionada a HOPS/CORVET) e com o complexo VPS33B–VIPAR para dar suporte à docagem de vesículas, à fusão de membranas e à manutenção da polaridade epitelial. Em células de camundongo, a atividade da VPS33B contribui para a triagem de cargas, a biogênese de organelas relacionadas a lisossomos e a secreção regulada, conectando-a a vias mais amplas que controlam a homeostase de membranas e o transporte intracelular. A perturbação do tráfego dependente de VPS33B tem sido associada a defeitos no transporte polarizado e na formação de grânulos plaquetários, fornecendo uma base mecanística para estudar patologias que envolvem disfunção epitelial e hematopoética.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VPS33B (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vps33b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vps33b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vps33b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VPS33B.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vps33b para a investigação da sinalização de VPS33B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vps33b críticos para a função VPS33B
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vps33b para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vps33b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo VPS33B Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR VPS33B (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vps33b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vps33b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.