VIP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423677
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VIP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico VIP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VIP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423677 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Vip codifica o peptídeo intestinal vasoativo (VIP), um neuropeptídeo que sinaliza principalmente por meio dos GPCRs VIPR1 e VIPR2 para estimular a adenilato ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar programas transcricionais dependentes de PKA/CREB. Em camundongos, o VIP contribui para a comunicação neuroendócrina, a coordenação do ritmo circadiano no núcleo supraquiasmático e a regulação do tônus do músculo liso, da vasodilatação e da atividade secretória em tecidos periféricos. A sinalização mediada por VIP modula a polarização de células imunes e a produção de citocinas, conectando essa via à homeostase inflamatória e à função de barreira mucosa. A desregulação da sinalização VIP/VIPR tem sido associada a respostas neuroinflamatórias alteradas, fenótipos de motilidade e secreção gastrointestinal e efeitos dependentes do contexto sobre a imunidade associada a tumores e características neuroendócrinas em modelos de doença.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VIP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vip em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vip, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vip na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VIP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vip para a investigação da sinalização de VIP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vip críticos para a função VIP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vip para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo VIP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo VIP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vip. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo VIP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR VIP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vip para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vip definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.