vinculin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400227-NIC

VCLはビンキュリン（vinculin）をコードする遺伝子であり、ビンキュリンは細胞骨格アダプターとして、焦点接着や接着帯（アドヘレンスジャンクション）においてインテグリンおよびカドヘリンをアクチンネットワークに連結し、細胞－細胞外マトリックス接着と細胞－細胞接着を安定化させます。ビンキュリンは張力に応答して接着複合体の組み立てを調整することでメカノトランスダクションにも関与し、細胞の広がり、牽引力、移動に影響します。タリン、パキシリン、α-アクチニン、F-アクチンとの相互作用を介して、RhoファミリーGTPase、アクチン再編成、接着のターンオーバーに関連するシグナル伝達経路を統合します。VCLの発現変化や接着ダイナミクスの異常は、組織の完全性の低下やリモデリング異常の表現型と関連づけられており、がん細胞の浸潤、心筋細胞の構造、線維化に伴う細胞外マトリックス応答などの文脈で頻繁に研究されています。

vinculin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における VCL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、VCL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、VCLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、VCLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。