Villin Plasmide Double Nickase (h): sc-400587-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Villin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Villin Double Nickase Plasmid (h) e il Villin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira VIL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Villin Antibody (1D2C3): sc-58897
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Villin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Villin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VIL1 codifica la villina, una proteina legante l’actina regolata dal Ca²⁺, arricchita nelle cellule intestinali e in altre cellule epiteliali, dove aggrega (bundling), cappuccia (capping) e recide (severing) la F-actina per sostenere l’assemblaggio dei microvilli e l’architettura dell’orletto a spazzola. Attraverso il rimodellamento dinamico del citoscheletro apicale, la villina contribuisce alla polarità epiteliale, alla funzione di barriera e a processi legati alla migrazione cellulare e alla riparazione delle ferite. L’espressione alterata di VIL1 è ampiamente utilizzata come marcatore di differenziazione epiteliale, e la disregolazione dei programmi citoscheletrici associati alla villina è stata studiata in contesti di danno epiteliale, infiammazione e biologia tumorale. In quanto impalcatura per le dinamiche dell’actina, la villina collega la segnalazione del calcio e la regolazione dipendente dai fosfoinositidi al mantenimento strutturale della superficie apicale.
Villin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus VIL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di VIL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di VIL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con VIL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.