VILL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423675

Visão geral

Vill codifica a villina-like (VILL), uma proteína citosquelética ligante de actina, enriquecida em contextos epiteliais, onde contribui para a organização e a remodelação de redes de F-actina. Proteínas da superfamília villina/gelsolina regulam o corte (severing), o empacotamento em feixes (bundling) e a estabilização de filamentos de actina, conectando sinais de cálcio e fosfoinositídeos a alterações na forma celular, na polaridade e na arquitetura associada à barreira. Por meio dessas funções, a VILL é relevante para vias que governam a diferenciação epitelial, a organização de microvilosidades e a remodelação dinâmica de junções, que influenciam a homeostase tecidual. A desregulação da dinâmica da actina e da integridade estrutural do epitélio está amplamente implicada em inflamação, disfunção de barreira e remodelação associada a tumores, tornando Vill um locus útil para estudos mecanísticos do controle do citoesqueleto.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VILL (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vill em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vill, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vill na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VILL.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vill para a investigação da sinalização de VILL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vill críticos para a função VILL
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vill para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VILL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo VILL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vill. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VILL Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR VILL (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vill para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vill definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.