VDUP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400664-ACT

A proteína de interação com tioredoxina TXNIP, também conhecida como VDUP1, é um regulador sensível ao estado redox que se liga à tioredoxina para modular a capacidade antioxidante celular e as respostas ao estresse oxidativo. A TXNIP integra sinais de nutrientes e de estresse ao metabolismo ao influenciar a captação de glicose e o fluxo glicolítico, e se conecta à AMPK e a outras vias de sensoriamento energético. Ela também relaciona o desequilíbrio redox à sinalização inflamatória por meio de efeitos sobre a atividade do inflamassoma NLRP3 e a produção de citocinas em múltiplos contextos celulares. A expressão desregulada de TXNIP tem sido associada a disfunção metabólica, inflamação vascular, fenótipos de estresse neurodegenerativo e adaptação de células tumorais ao estresse oxidativo e nutricional, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de vias relevantes para doenças.

VDUP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TXNIP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VDUP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TXNIP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TXNIP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VDUP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TXNIP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VDUP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VDUP1 em células tumorais com expressão de TXNIP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.