Vav Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400606-LAC

Il gene umano **VAV1** codifica **Vav**, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) ematopoietico che collega la segnalazione degli immunorecettori e delle citochine alle GTPasi della famiglia Rho, tra cui **RAC1** e **CDC42**. In seguito alla fosforilazione a valle delle vie del **TCR/BCR** e dei recettori **Fc**, Vav coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina, l’attivazione delle integrine, i flussi di calcio e programmi trascrizionali che modellano lo sviluppo, l’attivazione e la funzione effettrice dei linfociti. L’attività di **VAV1** interseca le vie di segnalazione **PI3K–AKT**, **PLCγ** e **MAPK** per regolare adesione cellulare, migrazione e formazione della sinapsi immunologica. Una segnalazione di **VAV1** deregolata e mutazioni sono state associate a disfunzioni immunitarie e a segnalazione oncogenica nelle neoplasie ematologiche, a supporto del suo impiego nello studio delle reti di segnalazione immunitaria e dei meccanismi di trasformazione.

Le particelle di attivazione lentivirale Vav (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di VAV1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Vav (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione VAV1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Vav. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo VAV1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.