Vasohibin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403526-ACT

O VASH1 humano codifica a vasohibina-1, um regulador da angiogênese associado ao endotélio, induzido por estímulos pró-angiogênicos e que atua como um modulador de feedback negativo da proliferação e migração endoteliais. A vasohibina-1 influencia o remodelamento vascular e programas de maturação dos vasos, estando ligada a processos celulares que incluem interações com a matriz extracelular e sinalização responsiva ao estresse no microambiente vascular. A expressão alterada de VASH1 tem sido associada à neovascularização patológica e à angiogênese tumoral, tornando-o um nó molecular útil para estudar a homeostase endotelial e fenótipos microvasculares. Como fator regulatório vascular, o VASH1 é frequentemente investigado em modelos de isquemia, alterações vasculares associadas à inflamação e biologia do câncer, para dissecar a sinalização angiogênica dependente do contexto.

Vasohibin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VASH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Vasohibin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VASH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VASH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Vasohibin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VASH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Vasohibin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Vasohibin-1 em células tumorais com expressão de VASH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.