ValRS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423653

Panoramica

Vars codifica la valil‑tRNA sintetasi (ValRS), una aminoacil‑tRNA sintetasi citosolica che lega la valina al suo tRNA cognato, garantendo la fedeltà della traduzione e l’omeostasi del proteoma. Mantenendo una decodifica accurata durante la sintesi proteica, ValRS sostiene processi fondamentali, tra cui la funzione del ribosoma, le risposte integrate allo stress dovute a squilibri di amminoacidi e reti più ampie di proteostasi. L’alterazione della carica degli aminoacil‑tRNA può compromettere la crescita cellulare e l’adattamento allo stress, collegando questa via a meccanismi rilevanti per il neurosviluppo, la biologia neuromuscolare e il coordinamento mitocondrio–citosol tramite una modificata richiesta proteomica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ValRS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vars in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vars insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vars a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ValRS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vars per lo studio della segnalazione di ValRS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vars critici per la funzione di ValRS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vars per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ValRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ValRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vars. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ValRS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ValRS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vars per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vars definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.