USP22 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403660-ACT

USP22 (Ubiquitin-spezifische Peptidase 22) ist ein deubiquitinierendes Enzym, das als zentrale regulatorische Komponente des SAGA-Transkriptionskoaktivator-Komplexes fungiert. Dort entfernt es Ubiquitin von Histon H2B, um die Chromatinzugänglichkeit und die Transkriptionsleistung zu modulieren. Über die epigenetische Kontrolle der Genexpression beeinflusst USP22 den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten und Differenzierungsprogramme und verknüpft dabei Ubiquitin-Signale mit der Transkriptionsregulation. Eine veränderte USP22-Aktivität wurde mit fehlregulierten proliferativen Signalwegen und einer transkriptionellen Umprogrammierung in verschiedenen krebsbezogenen Kontexten in Verbindung gebracht, was USP22 als molekularen Ansatzpunkt zur Untersuchung onkogener Genexpressionsnetzwerke unterstützt. In menschlichen Zellmodellen bietet die Perturbation von USP22 eine Möglichkeit zu untersuchen, wie Histon-Deubiquitinierung die signalweg-spezifische Transkription und die Proteostase beeinflusst.

USP22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen USP22-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

USP22 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des USP22-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der USP22-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen USP22-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native USP22-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von USP22-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des USP22-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem USP22-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.