USP22 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403660-ACT

USP22（ubiquitin specific peptidase 22）は脱ユビキチン化酵素であり、SAGA転写共活性化複合体の主要な制御因子として機能する。USP22はヒストンH2Bからユビキチンを除去することでクロマチンのアクセス性と転写出力を調節する。遺伝子発現のエピジェネティック制御を介して、USP22は細胞周期の進行、DNA損傷応答、分化プログラムに影響を与え、ユビキチンシグナル伝達と転写制御を統合している。USP22活性の変化は、複数のがん関連状況で観察される増殖シグナルの制御破綻や転写プログラムの再配線と関連づけられており、腫瘍性の遺伝子発現ネットワークを研究するための分子レベルの入口としての有用性を支持する。ヒト細胞モデルでは、USP22を撹乱することで、ヒストン脱ユビキチン化が経路特異的な転写およびプロテオスタシスに与える影響を検証できる。

USP22 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性USP22の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

USP22 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における USP22 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUSP22転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性USP22の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUSP22遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUSP22依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUSP22発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUSP22経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。