urocortin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403604-ACT

Das humane UCN kodiert Urocortin, ein sezerniertes Neuropeptid aus der Familie der Corticotropin-Releasing-Faktoren, das vor allem über CRHR2 und CRHR1 signalisiert, um cAMP/PKA-abhängige transkriptionelle Programme zu modulieren. Urocortin ist an neuroendokrinen Stressantworten beteiligt und koordiniert zelluläre Prozesse wie Sekretion, metabolische Anpassung und inflammatorische Signalübertragung in zentralen und peripheren Geweben. Über CRH-Rezeptor-Signalwege beeinflusst UCN den Gefäßtonus, die gastrointestinale Funktion und die kardiale Physiologie und verknüpft seine Expression mit Studien zur stressbezogenen Biologie und zur kardiometabolischen Regulation. Veränderte Urocortin-Signalgebung wurde u. a. im Zusammenhang mit Angst- und depressionsassoziierten Phänotypen, Herzinsuffizienz und entzündlichen Erkrankungen untersucht und unterstützt mechanistische Forschung zur Dysregulation der CRH-Achse.

urocortin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UCN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

urocortin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UCN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UCN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen urocortin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UCN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von urocortin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des urocortin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UCN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.