UGT2B28 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404211-ACT

UGT2B28 kodiert eine humane UDP-Glucuronosyltransferase, die die Glucuronidierung endogener Metabolite und Xenobiotika katalysiert, deren Löslichkeit erhöht und so die zelluläre Eliminierung fördert. Diese Phase‑II‑Stoffwechselaktivität trägt zur Entgiftung und zur Hormonhomöostase bei, indem sie die Verfügbarkeit steroidabgeleiteter Substrate und anderer lipophiler Verbindungen moduliert. Die Expression von UGT2B28 wird gewebespezifisch und kontextabhängig reguliert, was sie mit metabolischer Anpassung und Reaktionen auf chemische Exposition verknüpft. Veränderte Aktivität und Expressionsmuster von UGT2B28 werden häufig in Studien zu Arzneistoffmetabolismus, endokriner Signalgebung und Krankheitszuständen untersucht, bei denen Steroidverarbeitung und Entgiftungswege gestört sind.

UGT2B28 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UGT2B28-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UGT2B28 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UGT2B28-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UGT2B28-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UGT2B28-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UGT2B28-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UGT2B28-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UGT2B28-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UGT2B28-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.