Plásmido Doble Nickase (m) Tyrosinase: sc-423566-NIC

El gen Tyr del ratón codifica la tirosinasa, una oxidasa dependiente de cobre que cataliza pasos clave y limitantes de la velocidad en la biosíntesis de melanina, incluida la conversión de L-tirosina en DOPA y DOPAquinona dentro de los melanosomas. La actividad de la tirosinasa se integra con los programas de diferenciación de los melanocitos y con las vías de biogénesis de orgánulos que controlan la producción, el transporte y el almacenamiento del pigmento. La alteración de Tyr perturba la síntesis de eumelanina y feomelanina, modificando fenotipos de pigmentación que se utilizan ampliamente como lecturas manejables en biología del desarrollo y biología celular. Dado que los genes de la vía de la melanina influyen en la química oxidativa y en las respuestas celulares al estrés, Tyr se estudia con frecuencia en modelos de variación pigmentaria y trastornos genéticos relacionados.

Tyrosinase El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tyr en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tyr. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tyr. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tyr alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.