TSSC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423530

Übersicht

Phlda2 kodiert das Protein „pleckstrin-homology-like domain family A member 2“, auch als TSSC3 bekannt – ein geprägter (imprinteter), wachstumsregulierender Faktor, der bei der Maus mit der Kontrolle der Plazentaentwicklung und des fetalen Wachstums in Verbindung gebracht wird. TSSC3 ist mit Signalprozessen verknüpft, die Zellproliferation und -überleben beeinflussen, darunter Signalwege, die phosphoinositidabhängige Reize integrieren, sowie eine stressresponsive Regulation der Genexpression. Eine veränderte Dosierung oder eine dysregulierte Prägung (Imprinting) am Phlda2-Lokus wurde mit Entwicklungsphänotypen assoziiert und ist relevant für Untersuchungen zur Wachstumskontrolle und zu tumorunterdrückerähnlichen Funktionen in spezifischen zellulären Kontexten. Als maternell exprimiertes Gen ist Phlda2 zudem ein geeignetes Modell, um Parent-of-Origin-Effekte, epigenetische Regulation und dosissensitive transkriptionelle Netzwerke zu untersuchen.

Das TSSC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Phlda2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Phlda2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Phlda2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TSSC3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Phlda2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TSSC3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Phlda2-Exone abzielen, die für die TSSC3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Phlda2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TSSC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TSSC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Phlda2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TSSC3 HDR-Plasmid (m) und TSSC3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Phlda2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Phlda2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.