Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin α (m): sc-423481
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Tropomyosin α Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Tropomyosin α, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tropomyosin α Antibody (F-6): sc-376541
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin α (m) | sc-423481 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Tpm1** code la tropomyosine α, une protéine en coiled-coil se liant à l’actine, qui stabilise l’actine filamentaire et spécifie la fonction actomyosine en régulant l’accès de la myosine à l’actine. La tropomyosine α contribue à l’architecture du cytosquelette, à la formation des fibres de stress et aux dynamiques contractiles qui façonnent l’adhérence cellulaire, la migration et la mécanotransduction. Par son rôle dans l’organisation des filaments d’actine, **TPM1** s’inscrit dans des voies contrôlant le remodelage de l’actine sarcomérique et non musculaire, notamment la régulation du cytosquelette dépendante des GTPases Rho. Des altérations de l’équilibre des isoformes de tropomyosine et de la régulation de l’actine dépendante de **TPM1** ont été associées à des défauts de fonction musculaire et à une dérégulation plus large du cytosquelette, pertinente dans des modèles de cardiomyopathie et de motilité des cellules tumorales.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tropomyosin α (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tpm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tpm1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tpm1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tropomyosin α.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tpm1 pour l'étude de la signalisation de Tropomyosin α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tpm1 essentiels à la fonction de Tropomyosin α
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tpm1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Tropomyosin α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tropomyosin α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tpm1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Tropomyosin α plasmide HDR (m) et le Tropomyosin α (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tpm1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tpm1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.