TROP-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402046-ACT

TACSTD2 codifica l’antigene di superficie delle cellule trofoblastiche umane TROP-2, una glicoproteina transmembrana di tipo I che svolge un ruolo nelle interazioni cellula-cellula e nella segnalazione epiteliale. TROP-2 modula la segnalazione intracellulare del Ca²⁺ e si collega a vie proliferative e di sopravvivenza, tra cui MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando programmi di adesione, migrazione e differenziamento. Un’espressione deregolata di TACSTD2 è frequentemente osservata nelle neoplasie epiteliali ed è associata a un comportamento invasivo alterato e all’eterogeneità tumorale, rendendolo un marcatore utile negli studi di biologia epiteliale. Inoltre, varianti con perdita di funzione di TACSTD2 sono collegate a difetti dell’epitelio corneale, a supporto di un ruolo nell’integrità tissutale e nel mantenimento della barriera.

TROP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TACSTD2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TROP-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TACSTD2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TACSTD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TROP-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TACSTD2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TROP-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TROP-2 nelle cellule tumorali con espressione di TACSTD2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.