TREM-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425490

Übersicht

Der Triggering-Rezeptor, der auf myeloischen Zellen 1 exprimiert wird (TREM-1), ist ein Immunrezeptor, der überwiegend auf Neutrophilen und Monozyten/Makrophagen vorkommt und entzündliche Reaktionen verstärkt, die durch Mustererkennungsrezeptoren eingeleitet werden. In der Maus integriert sich die TREM-1-Signalübertragung in adaptorvermittelte Signalwege und verstärkt dadurch die Aktivierung von NF-κB und MAPK, was die Produktion proinflammatorischer Zytokine und Chemokine erhöht und die Effektorfunktionen der angeborenen Immunität weiter stärkt. Die Trem1-Aktivität ist eng mit der Rekrutierung und Aktivierung myeloischer Zellen sowie mit der Kommunikation mit endothelialen und stromalen Kompartimenten während akuter und chronischer Entzündungen verknüpft. Eine fehlregulierte TREM-1-Signalübertragung wurde in Modellen entzündlicher und infektiöser Erkrankungen ebenso beschrieben wie im Zusammenhang mit tumorassoziierten myeloischen Phänotypen und Gewebeschädigungsprozessen, die durch übermäßige Zytokinantworten angetrieben werden.

Das TREM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trem1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trem1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trem1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TREM-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trem1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TREM-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trem1-Exone abzielen, die für die TREM-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trem1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TREM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TREM-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trem1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TREM-1 HDR-Plasmid (m) und TREM-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trem1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trem1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.