TRB-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401746-LAC

TRIB3 codifica la pseudokinasi tribbles 3 (TRB-3), un adattatore simile a una chinasi ma cataliticamente inattivo, che modula la trasduzione del segnale fungendo da impalcatura per interazioni proteina‑proteina. TRB-3 è nota soprattutto per la regolazione negativa dell’asse PI3K/AKT attraverso l’interazione con AKT, influenzando così la segnalazione insulinica, il metabolismo cellulare e i programmi adattativi allo stress. Integra inoltre le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico e può intersecare le vie correlate a MAPK e TGF-β/SMAD, contribuendo a plasmare sopravvivenza cellulare, differenziamento e segnalazione infiammatoria. Un’espressione deregolata di TRIB3 è stata associata a disfunzioni metaboliche, processi cardiovascolari e neurodegenerativi e a fenotipi rilevanti per il cancro, come alterazioni dell’apoptosi e tolleranza allo stress da terapia, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici focalizzati sulle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale TRB-3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TRIB3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TRB-3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TRIB3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TRB-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TRIB3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.