Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TRB-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401746-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRB-3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRB-3 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRB-3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRIB3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRB-3: sc-365842
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRB-3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401746-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRB-3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401746-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIB3 kodiert die Pseudokinase Tribbles 3 (TRB-3), ein stressinduzierbares regulatorisches Protein, das als Gerüstprotein (Scaffold) wirkt und Kinase-Signalwege moduliert, anstatt Phosphorylierungen katalytisch zu vermitteln. TRB-3 ist an integrierten Stressantworten und der metabolischen Kontrolle beteiligt, indem es über Interaktionen die AKT-Signalübertragung, die Output-Stärke des Insulinsignalwegs und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme beeinflusst; zudem kann es zelluläre Entscheidungen hinsichtlich Überleben, Apoptose und Autophagie mitsteuern. Seine Expression reagiert auf ER-Stress und den Nährstoffstatus und verknüpft TRB-3 damit mit Signalwegen wie PI3K–AKT sowie ATF4/CHOP-assoziierten Netzwerken. Eine Fehlregulation von TRIB3 wurde in der Literatur mit veränderter Glukosehomöostase, Entzündung und krebsrelevanten Signalphänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Stressadaptations-Schaltkreise macht.
TRB-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRIB3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRIB3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRIB3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRIB3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.