Plásmido Doble Nickase (h) TRB-3: sc-401746-NIC

TRIB3 codifica la pseudocinasa tribbles 3 (TRB-3), una proteína reguladora inducible por estrés que actúa como andamiaje para modular la señalización de quinasas, en lugar de catalizar la fosforilación. TRB-3 participa en respuestas integradas al estrés y en el control metabólico mediante interacciones que influyen en la señalización de AKT, en la salida de la vía de la insulina y en programas transcripcionales posteriores, y puede moldear decisiones celulares relacionadas con la supervivencia, la apoptosis y la autofagia. Su expresión responde al estrés del RE y al estado nutricional, lo que la vincula a vías como PI3K–AKT y redes asociadas a ATF4/CHOP. En la literatura, la desregulación de TRIB3 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis de la glucosa, inflamación y fenotipos de señalización relevantes para el cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de los circuitos de adaptación al estrés.

TRB-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRIB3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRIB3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRIB3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRIB3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.