TRAF3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400473-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRAF3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TRAF3 Double Nickase Plasmid (h) e il TRAF3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TRAF3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRAF3 Antibody (G-6): sc-6933
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRAF3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400473-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRAF3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400473-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRAF3 (fattore 3 associato al recettore del TNF) è una proteina adattatrice e una ligasi E3 dell’ubiquitina che coordina la trasduzione del segnale a valle dei membri della superfamiglia dei recettori del TNF, dei recettori Toll-like e di alcuni recettori di riconoscimento di pattern. Regolando l’assemblaggio ubiquitina-dipendente dei complessi di segnalazione, TRAF3 modula le risposte dell’interferone di tipo I, l’attività delle MAPK e l’output della via di NF-κB, includendo la limitazione della segnalazione non canonica di NF-κB tramite il controllo della stabilità di NIK. Queste funzioni rendono TRAF3 un determinante chiave dell’omeostasi immunitaria innata e adattativa, influenzando la produzione di citochine, la segnalazione dei recettori dell’antigene e le decisioni di sopravvivenza cellulare. Alterazioni nell’espressione o nella funzione di TRAF3 sono associate a disregolazione immunitaria e sono state riportate in contesti di segnalazione legati a neoplasie, a sostegno del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca su infiammazione e biologia del cancro.
TRAF3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TRAF3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TRAF3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TRAF3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TRAF3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.