TRAF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400361-ACT

TRAF2 (TNF-Rezeptor-assoziierter Faktor 2) ist ein Adapterprotein und eine E3-Ubiquitin-Ligase, die Mitglieder der TNF-Rezeptor-Superfamilie mit nachgeschalteter Signalübertragung koppelt und dadurch Entzündungs- und Stressantworten mitprägt. Durch die Koordination K63-verknüpfter Ubiquitinierungsereignisse fördert TRAF2 die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege und trägt über Crosstalk mit RIPK1-abhängigen Komplexen zur Kontrolle von Apoptose und Nekroptose bei. TRAF2 beeinflusst zudem die angeborene Immunantwort sowie die Signalgebung von Pattern-Recognition-Rezeptoren und kann über die Regulation der NIK-Stabilität die JNK- und nicht-kanonische NF-κB-Dynamik modulieren. Eine dysregulierte TRAF2-Signalgebung wird in verschiedenen Krankheitskontexten mit veränderter Immunhomöostase, chronischer Entzündung und onkogenen Signalprogrammen in Verbindung gebracht, wodurch TRAF2 einen nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der TNF-Signalkaskaden darstellt.

TRAF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRAF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRAF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRAF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRAF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRAF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRAF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRAF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRAF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRAF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.