Tra-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404739-ACT

Il gene umano **TRA2B** codifica **Tra-2**, un regolatore dello splicing legante l’RNA che riconosce elementi enhancer dello splicing esonico e modula l’inclusione degli esoni in un’ampia gamma di bersagli di pre‑mRNA. Tra-2 partecipa a reti associate allo spliceosoma che definiscono programmi di splicing alternativo in grado di controllare la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e gli output trascrizionali responsivi allo stress. Un’espressione o un’attività deregolata di **TRA2B** è stata collegata ad alterazioni diffuse dello splicing osservate in contesti oncologici e di neurosviluppo, in cui lo squilibrio tra isoforme può rimodellare la segnalazione e il metabolismo dell’RNA. In quanto nodo centrale della regolazione genica post‑trascrizionale, **TRA2B** è spesso studiato per collegare il controllo dello splicing dipendente dalla sequenza al riassetto delle vie di segnalazione e ai cambiamenti del trascrittoma associati alla malattia.

Tra-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TRA2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tra-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TRA2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TRA2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tra-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TRA2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tra-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tra-2 nelle cellule tumorali con espressione di TRA2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.