TOPORS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406762

概要

TOPORS（topoisomerase I 結合、アルギニン／セリンリッチタンパク質）遺伝子は、RING 型 E3 ユビキチンリガーゼおよび SUMO1 E3 リガーゼとして機能する核内タンパク質をコードしており、ユビキチン化と SUMO 化を統合することでタンパク質の安定性やシグナル伝達を制御します。プロミエロサイト性白血病（PML）核内小体に局在し、DNA 損傷応答や転写に関連する過程の制御を通じてゲノム恒常性の維持に寄与します。TOPORS は p53 シグナル伝達やプロテオスタシスの制御とも関連づけられており、細胞ストレス応答や細胞周期調節とのつながりが示されています。TOPORS の遺伝的変異や発現変動は、網膜変性の表現型や、疾患に関連する状況における核内シグナル伝達の破綻に対するより広範な感受性と関連していることが報告されています。

TOPORS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTOPORS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TOPORS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TOPORSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TOPORSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TOPORSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TOPORS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TOPORSの機能に不可欠なTOPORSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TOPORSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TOPORS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTOPORS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TOPORS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TOPORS HDRプラスミド（h）および TOPORS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTOPORSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTOPORS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。