TNFα-IP 8L3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410450-ACT

TNFAIP8L3（TNFα-IP 8L3）は、サイトカイン刺激の下流で免疫関連シグナル伝達、細胞生存、炎症応答の制御に関与するとされるTNFAIP8/TIPEファミリーの一員です。ヒト細胞では、TNFAIP8L3がアポトーシス誘導の閾値やストレス適応経路の調節に関与することが示唆されており、NF-κB関連の転写プログラムや、より広範なTNF駆動性ネットワーク活性との機能的なつながりも報告されています。TIPEファミリータンパク質の発現異常は、炎症の制御破綻や腫瘍化表現型を伴うさまざまな状況で報告されており、腫瘍微小環境の生物学や免疫細胞シグナル伝達におけるTNFAIP8L3の役割を検討する意義が支持されています。TNFAIP8L3を研究することで、サイトカイン応答性の制御因子が増殖、細胞死シグナル、細胞恒常性をどのように形作るのかを明らかにする手がかりになります。

TNFα-IP 8L3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFAIP8L3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TNFα-IP 8L3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFAIP8L3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFAIP8L3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TNFα-IP 8L3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFAIP8L3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTNFα-IP 8L3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFAIP8L3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTNFα-IP 8L3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。