Plásmido CRISPR de Activación (h) TMPRSS11D: sc-407568-ACT

TMPRSS11D codifica una proteasa de serina transmembrana de tipo II expresada predominantemente en tejidos epiteliales, donde contribuye a la proteólisis pericelular en la superficie celular. Al escindir sustratos extracelulares o asociados a la membrana, TMPRSS11D puede influir en la diferenciación epitelial, la remodelación de la barrera y las vías de señalización activadas por proteasas que modulan las respuestas inflamatorias y la homeostasis tisular. La actividad o expresión desregulada de proteasas de serina ancladas a membrana se ha asociado con una integridad mucosa alterada y programas de remodelación aberrantes observados en trastornos crónicos de las vías respiratorias y del tracto aerodigestivo superior. Por lo tanto, TMPRSS11D es un objetivo útil para investigar la regulación dependiente de proteasas de los microambientes epiteliales y los programas transcripcionales específicos del contexto en células humanas.

TMPRSS11D El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMPRSS11D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMPRSS11D El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMPRSS11D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMPRSS11D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMPRSS11D. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMPRSS11D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMPRSS11D en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMPRSS11D en células tumorales con expresión de TMPRSS11D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.