Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM175 (h): sc-413613

Présentation

TMEM175 code un canal transmembranaire lysosomal et des endosomes tardifs qui contribue à l’homéostasie ionique des organites et à la stabilité du pH luminal. En régulant la fonction lysosomale, TMEM175 influence le flux autophagique, le trafic endolysosomal et les voies de protéostasie qui gouvernent la dégradation des protéines et des organites endommagés. Une activité altérée de TMEM175 a été associée à une perturbation de l’élimination dépendante des lysosomes et des réponses au stress cellulaire, reliant ce gène à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence. TMEM175 est donc étudié dans le contexte de la biologie des lysosomes, du dialogue avec le contrôle qualité mitochondrial, et des voies qui modulent l’adaptation inflammatoire et métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM175 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM175 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM175, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM175 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM175.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM175 pour l'étude de la signalisation de TMEM175, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM175 essentiels à la fonction de TMEM175
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM175 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM175 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM175 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM175. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM175 plasmide HDR (h) et le TMEM175 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM175 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM175 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.