TIGAR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401390-ACT

TIGAR（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator）は、p53応答性タンパク質をコードし、フルクトース-2,6-ビスリン酸ホスファターゼとして機能します。これにより解糖系フラックスを低下させる一方で、NADPH産生とレドックス恒常性の維持を支えるペントースリン酸経路（PPP）の活性を促進します。細胞内の活性酸素種（ROS）や代謝バランスを調節することで、TIGARは酸化ストレスまたは遺伝毒性ストレス下におけるアポトーシス、オートファジー、ならびに細胞生存に影響を与えます。この代謝チェックポイントはp53シグナル伝達および増殖や損傷耐性を形作る広範なストレス応答ネットワークと交差します。TIGARの発現異常は、複数のがん種において腫瘍代謝の変化やストレス適応と関連づけられており、代謝上の脆弱性やレドックス制御に基づく細胞運命決定を研究するための有用な標的となります。

TIGAR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TIGARの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TIGAR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TIGAR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTIGAR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TIGARの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTIGAR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTIGAR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTIGAR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTIGAR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。