Plasmide CRISPR/Cas9 KO THOC1 (h): sc-403390

Présentation

THOC1 code une sous-unité essentielle du complexe THO/TREX, qui couple la transcription à la maturation de l’ARNm et à son export nucléaire en coordonnant l’assemblage co-transcriptionnel des ribonucléoprotéines messagères (mRNP). Par ses interactions avec l’ARN polymérase II et des facteurs d’export, THOC1 soutient la maturation des transcrits à l’échelle du génome, préserve l’homéostasie des R-loops et contribue au maintien de l’intégrité de la réplication et de la transcription. La perturbation de l’export d’ARN dépendant de THOC1 peut affecter la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress, reliant ce facteur à des voies qui influencent la stabilité du génome. Des altérations de l’expression de THOC1 et des dysfonctionnements du complexe TREX ont été observés dans plusieurs contextes liés au cancer ainsi que dans des études de troubles du métabolisme de l’ARN, faisant de THOC1 un nœud pertinent pour des investigations mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO THOC1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène THOC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du THOC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert THOC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine THOC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en THOC1 pour l'étude de la signalisation de THOC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de THOC1 essentiels à la fonction de THOC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de THOC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le THOC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le THOC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus THOC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le THOC1 plasmide HDR (h) et le THOC1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie THOC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles THOC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.