Plasmide CRISPR d'Activation (m) TGF beta 1: sc-423364-ACT

Le gène murin *Tgfb1* code le facteur de croissance transformant bêta 1 (TGF‑β1), une cytokine sécrétée qui signale principalement via TGFBR1/2 afin d’activer une transcription dépendante de SMAD2/3, tout en interagissant avec des voies non canoniques telles que MAPK, PI3K/AKT et les GTPases Rho. TGF‑β1 est un régulateur central du remodelage de la matrice extracellulaire, de la transition épithélio‑mésenchymateuse, de la différenciation des cellules immunitaires et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Une activité dérégulée de *Tgfb1* est largement impliquée dans le remodelage fibrotique, une immunosuppression ou une inflammation aberrante, une réparation des plaies altérée et les interactions tumeur–stroma. Dans des modèles murins, la perturbation de *Tgfb1* est fréquemment utilisée pour étudier la signalisation stromale, la polarisation des macrophages et des lymphocytes T, ainsi que le contrôle de la croissance dépendant du contexte, dans le développement et dans des phénotypes de type pathologique.

TGF beta 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tgfb1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TGF beta 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tgfb1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tgfb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TGF beta 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tgfb1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TGF beta 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TGF beta 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tgfb1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.