TFIID/TATA Binding Protein/TBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400579-ACT

TBP codifica a proteína de ligação à TATA (TATA-binding protein), um componente central conservado do complexo TFIID que reconhece elementos do promotor e dá início à montagem do complexo de pré-iniciação da RNA polimerase II. Ao ligar-se à caixa TATA e coordenar o recrutamento de fatores gerais de transcrição, a TBP sustenta a transcrição basal e influencia a seleção de promotores, o engajamento com a cromatina e a dinâmica de iniciação transcricional. A TBP também contribui para programas de transcrição conduzidos pelas polimerases I e III, conectando-se à biogênese de ribossomos, à síntese de tRNAs e à proteostase global. Alterações na dosagem de TBP ou perturbações funcionais têm sido associadas à desregulação da expressão gênica e a fenótipos neurodegenerativos, tornando-a um nó útil para estudar a homeostase transcricional em modelos relevantes para doenças.

TFIID/TATA Binding Protein/TBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TFIID/TATA Binding Protein/TBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TFIID/TATA Binding Protein/TBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TFIID/TATA Binding Protein/TBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TFIID/TATA Binding Protein/TBP em células tumorais com expressão de TBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.