TERT Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400316-LAC

Il TERT umano codifica la subunità catalitica della telomerasi (telomerase reverse transcriptase), che estende le ripetizioni di DNA telomerico utilizzando uno stampo di RNA per mantenere l’integrità delle estremità cromosomiche. Mantenendo l’omeostasi della lunghezza dei telomeri, TERT sostiene il potenziale replicativo e la stabilità del genoma, collegandosi alle risposte al danno del DNA, ai programmi di senescenza e all’immortalizzazione cellulare. La regolazione di TERT interseca reti di segnalazione proliferativa, come il controllo trascrizionale associato a MYC e WNT/β-catenina, e gli stati epigenetici della cromatina a livello del promotore di TERT. Un’espressione aberrante di TERT o un’attività telomerasica alterata sono frequentemente associate alla trasformazione oncogenica e sono anche implicate nei disordini della biologia dei telomeri che influenzano il rinnovamento tissutale e fenotipi legati all’invecchiamento.

Le particelle di attivazione lentivirale TERT (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TERT in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TERT (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TERT, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TERT. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TERT e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.