Plasmide CRISPR d'Activation (m) TEF-1: sc-423326-ACT

Tead1 chez la souris code le facteur de transcription TEF-1, une protéine de liaison à l’ADN portant un domaine TEA/ATTS, qui coopère avec les coactivateurs YAP/TAZ pour réguler l’activité des enhancers et des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la survie et la spécification de lignage. TEF-1 est un effecteur central de la voie Hippo et intègre des signaux mécaniques, le contact cellule–cellule et des signaux de la matrice extracellulaire afin de modeler la croissance tissulaire et la taille des organes. Au cours du développement et dans l’homéostasie de l’adulte, TEF-1 influence les réseaux géniques des cardiomyocytes et du muscle squelettique, ainsi que la régénération épithéliale et les états des cellules souches/progénitrices. Une transcription dépendante de TEAD dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes de contrôle anormal de la croissance et de programmes transcriptionnels fibrogènes ou oncogéniques, ce qui fait de Tead1 un nœud utile pour l’exploration de la voie dans des modèles murins.

TEF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Tead1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TEF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Tead1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Tead1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TEF-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Tead1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TEF-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TEF-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Tead1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.