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TDG双切口酶质粒(h) | sc-416599-NIC | 20 µg | $410.00 |
胸腺嘧啶 DNA 糖基化酶(TDG)是一种碱基切除修复(BER)酶,可从由 5-甲基胞嘧啶脱氨产生的 G:T 和 G:U 错配中切除胸腺嘧啶或尿嘧啶,从而帮助维持基因组完整性。除经典修复功能外,TDG 还与 TET 酶协同,通过处理氧化的 5-甲基胞嘧啶衍生物参与主动 DNA 去甲基化,因此与转录的表观遗传调控相联系。借助这些作用,TDG 会影响与复制和转录偶联的修复、染色质状态以及细胞对 DNA 损伤的应答。TDG 功能或调控的改变常被用于研究突变负荷、表观基因组不稳定性以及与癌症相关的基因表达程序。
TDG 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 TDG 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对TDG内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏TDG的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了TDG基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。