TCP-1 ζ2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403048-ACT

CCT6B kodiert die humane, chaperoninhaltige TCP1‑Untereinheit Zeta 2 (TCP‑1 ζ2), eine Komponente des zytosolischen TRiC/CCT‑Komplexes, der die ATP‑abhängige Faltung neu synthetisierter sowie durch Stress denaturierter Proteine vermittelt. Dieser Komplex ist zentral für die Proteostase, da er die Reifung von Zytoskelettproteinen wie Aktin und Tubulin unterstützt und die Proteinkontrolle mit dem Fortschreiten des Zellzyklus koordiniert. Über seine Rolle bei der Faltung und Assemblierung multimerer Proteinkomplexe beeinflusst TCP‑1 ζ2 Signalwege, die mit Zytoskelettdynamik, intrazellulärem Transport und zellulären Stressantworten verknüpft sind. Eine Fehlregulation der Chaperonin‑Aktivität wird häufig im Zusammenhang mit proteotoxischem Stress, veränderter Proliferation und systemweiten Umbauprozessen untersucht, wie sie in der Krebs‑ und Neurodegenerationsforschung beschrieben werden.

TCP-1 ζ2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCT6B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TCP-1 ζ2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCT6B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCT6B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TCP-1 ζ2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCT6B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TCP-1 ζ2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TCP-1 ζ2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCT6B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.