TCP-1 ζ2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403048-ACT

CCT6B codifica a subunidade zeta 2 da chaperonina humana contendo TCP1 (TCP-1 ζ2), um componente do complexo citosólico TRiC/CCT que medeia o dobramento dependente de ATP de proteínas recém-sintetizadas e de proteínas desnaturadas por estresse. Esse complexo é central para a proteostase, pois auxilia a maturação de proteínas do citoesqueleto, como actina e tubulina, e coordena o controle de qualidade proteico com a progressão do ciclo celular. Por seu papel no dobramento e na montagem de complexos multissubunitários, a TCP-1 ζ2 influencia vias ligadas à dinâmica do citoesqueleto, ao transporte intracelular e às respostas celulares ao estresse. A desregulação da atividade de chaperoninas é frequentemente estudada em contextos de estresse proteotóxico, proliferação alterada e remodelamento em nível de sistemas observados em pesquisas sobre câncer e neurodegeneração.

TCP-1 ζ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCT6B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TCP-1 ζ2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCT6B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCT6B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TCP-1 ζ2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCT6B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TCP-1 ζ2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TCP-1 ζ2 em células tumorais com expressão de CCT6B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.